Разведение и содержание тест-объектов

Разведение и содержание тест-объектов

Разведение и содержание тест-объектов 

 

Цель: Изучить основные принципы лабораторного культивирования тест-объекта Daphnia magna Straus.

 Содержание и разведение дафний в лабораторных условиях осуществляется в шкафу-термолюминостате в стеклянных емкостях (банках) объемом 2,0-10,0 л.

SDC15177.JPG

Аквариум с культивируемой дафнией

 

Оптимальный температурный режим 20±2°С и продолжительность светового дня 12 часов. Дафнии культивируются на воде взятой из незагрязненных участков природных водоемов или отстоянной (дехлорированной) в течении 7 суток, водопроводной воде (жесткость ‒ 2,5-5,3 мгэкв/л; pH ‒  6,5-8,5; содержание растворенного кислорода  ‒   6,0-8,0 мг/л).

Измерение температуры, pH, концентрации растворенного кислорода и других физико-химических показателей в воде, которая используется для содержания лабораторной культуры дафний и водорослевой культуры проводится с использованием приборов (pH-метр, кислородомер и др.) либо лабораторных методов гидрохимического анализа. Методики анализов описаны в соответствующей технической документации (паспорта к приборам) и методических руководствах.

SDC15169.JPGSDC15175.JPG

Дамаскин Дима, учащийся объединения «Исследователи природы» (ДЭШ Дворца пионеров, 2011 год) измеряет температуру воды и рН  в банке с культивируемой дафнией магна

 

В качестве корма для дафний используются зеленые водоросли родов Chlorella, Scenedesmus, Selenastrum, Ankistrodesmus: 

KHlorella-1.jpgScenedesmus_quadricauda-HF.jpgSelenastrum-gracile_50-8.jpgAnkistrodesmus_falcatus.jpg

а также пекарские или кормовые дрожжи (при культивировании дафний для кормления рыб  можно использовать настой конского навоза).

Водоросли вносятся в концентрации 600-700 тыс.  клеток на 1 мл среды. Оптимальный режим для выращивания водорослей создается при культивировании на среде Тамия (см. табл.), круглосуточном освещении лампами дневного света и продувании атмосферного воздуха.  

Таблица

Состав питательной среды Тамия для культивирования водорослей

Компоненты средыМассовая концентрация в среде для культивирования, г/дм3

KNO3

MgSO4 7H2O

KH2PO43H2O

FeSO47H2O

Микроэлементы 

5,0

2,5

1,25

0,003

По 1 см3/дм3  растворов А и В*

Примечание: * Растворы А и В готовят отдельно, раствор А (Н3ВO3 — 2,86 г/дм3, МnСl22O — 1,81 г/дм3, ZnSO47H2O — 0,222 г/дм3) и раствор В (МоO3 — 17,64 мг/дм3; NH4VO3 — 22,96 мг/дм3). Затем отдельно стерилизуют каждый раствор 30 мин кипячением; охлаждают, плотно закрывают притертой пробкой и хранят в холодильнике при температуре от +2 °С до +4 °С до трех месяцев.

 

Подготовка водорослевого корма для дафний. Питательные среды готовятся на дистиллированной воде или кипяченой водопроводной. Навеску каждого вещества нужно растворить в небольшом количестве воды, а затем растворы слить вместе и общий объем довести до соответствующего объема. Среда Тамия перед внесением водорослей разбавляется в 3-5 раз.

Культуры водорослей вносятся в питательную среду в количестве, дающем видимое невооруженным глазом светлозеленое окрашивание. Через 7-10 дней, когда окраска в сосудах становится интенсивно зеленой, водоросли уплотняются 1-2-х суточным отстаиванием или центрифугированием. Над осадочный слой сливается сифоном, а уплотненная суспензия используется для кормления дафний. Она может храниться в холодильнике,  и в этом случае пригодна в качестве корма не более 14 дней. Перед кормлением определенный объем суспензии разбавляется в 2 раза дехлорированной водопроводной водой и вносится в сосуды с дафниями из расчета 1 мл корма на 1 л воды. В процессе культивирования дафний кормят суспензией зеленых водорослей 1 раз в сутки.

Подготовка дрожжевого корма. Дрожжевой корм готовится следующим образом: 1 г свежих или 0,3 г воздушно-сухих пекарских или кормовых дрожжей заливается 100 мл дистиллированной воды. После набухания дрожжи тщательно перемешиваются. Образовавшуюся суспензию нужно отстоять в течении 30 мин. Над осадочная жидкость добавляется в сосуды с дафниями в количестве 3 мл на 1 л воды. Этот корм является дополнительным к водорослевому и вносится дафниям 1-2 раза в неделю.

Маточные культуры дафний содержатся в цельностеклянных емкостях с плотностью посадки 20-30 дафний на 1 л среды. Воду в емкостях обновляют наполовину один раз в 7-10 суток.

Биотестирование воды и водных вытяжек проводят только на синхронизированной культуре дафний. Синхронизированной является одновозрастная культура, полученная от одной самки путем ациклического партеногенеза в третьем поколении. Такая культура генетически однородна. Рачки, ее составляющие, обладают близкими уровнями устойчивости к токсическим веществам, одновременно созревают и в одно время дают генетически однородное потомство. Для получения синхронизированной культуры отбирают одну самку средних размеров с выводковой камерой, заполненной эмбрионами, и помещают в химический стакан вместимостью 250 см3, заполненный культивационной водой на 200 см3. Появившуюся молодь переносят в кристаллизатор (25 особей на 1 дм3 воды) и культивируют указанным способом.

Полученная третья генерация является синхронизированной культурой и может быть использована для биотестирования в возрасте 6-24 часов.

 

Контрольные вопросы:

  1. На какой воде культивируется лабораторная культура дафний?
  2. Что используется в качестве корма дафний?
  3. Сколько миллилитров разбавленной суспензии кормовой культуры водорослей вносится в 1 л воды, в которой содержатся дафнии?
  4. Какая плотность посадки дафний в маточных культурах?
  5. С какой периодичностью и в каком объёме производится замена воды в емкостях с дафниями?
  6. Что такое "синхронизированная культура" дафний?

Задача:

В лаборатории содержалась культура дафнии магна. Вернувшись после отпуска, лаборант, отвечающий за кормление дафний и их лабораторное культивирование, обнаружил, сто дафний в банках нет. Что нужно сделать лаборанту, чтобы возобновить культуру дафний?


Автор:  Чаус З.А
Используемая литература: 

Чаус Б.Ю., Чаус З.А. Использование дафний в экологических исследованиях воды. — Уфа: изд-ние Башкирск. ун-та, 1995. — 96 с.

https://files.stroyinf.ru/Data2/1/4293842/4293842234.pdf

https://yandex.ru/images/search?text=водоросли%20Scenedesmus%20экосистема&lr=172&p=1&pos=65&rpt=simage&img_url=https%3A%2F%2Fwww.bioutils.ch%2Fckeditor_assets%2Fpictures%2F132%2Fcontent_scenedesmus.jpg 

 https://yandex.ru/images/search?text=водоросли%20Selenastrum&lr=172&pos=39&img_url=http%3A%2F%2Fwww.plingfactory.de%2FScience%2FAtlas%2FKennkarten%2520Algen%2FChlorophyta%2Fimage%2FSelenastrum-gracile_50-8.jpg&rpt=simage 

https://yandex.ru/images/search?text=водоросли%20ankistrodesmus&lr=172&pos=2&img_url=https%3A%2F%2Fbotany.natur.cuni.cz%2Falgo%2Fdatabase%2Fsites%2Fdefault%2Ffiles%2FH0320_13.JPG&rpt=simage